戴安娜出生在1961年7月1日傍晚時分，重7磅12盎司。她的出生並沒有受到她父母的熱烈歡迎，因為她是奧爾索普子爵的第三個女兒，而她父母，特別是奧爾索普子爵，希望生個男孩為斯賓塞家庭傳宗接代。她的父親稱她為“身體完美的孩子”，但馬上就將期待男孩降生的喜悅驟降至冰冷。這對迫切想要一個男孩子繼承名號的夫婦甚至連女孩子的名字都沒準備。一個星期後，這對夫婦才給她取名為“戴安娜·弗朗西絲”，“戴安娜”是斯賓塞家族一個祖先的名字，而“弗朗西絲”則是她母親的名字。
奧爾索普子爵稱戴安娜為“身體十分完美的孩子”，話中有潛台詞的。在戴安娜出生前18個月，子爵夫人生過一個嚴重畸形的男孩，取名為約翰，可憐的約翰只活了10個小時。更為可憐的是傷心欲絕的母親，她迫於家中長輩的壓力，去醫院接受了各種婦科檢查，看她到底有無毛病。在那時看來，接二連三地生女孩是女方的過錯。這位高傲要強、固執的子爵夫人被送到了倫敦各式各樣的醫院檢查身體，對於年僅25歲的子爵夫人來說，這是莫大的委屈，無可忍受的的侮辱。就在那個時期，奧爾索普子爵夫婦長期不和最終離婚的種子埋下了。戴安娜的弟弟查理·斯賓塞伯爵評價過那段時期，認為那是可怕的時期，他父母從未擺脫那時期的心理創傷和陰影。
1964年，戴安娜3歲時，斯賓塞家的繼承人，全家盼望的兒子降生了。這個繼承人查理在威斯敏斯特教堂接受洗禮，教母是當今伊麗莎白女王。雖說東西方有別，但在繼承人問題上，男尊女卑的現像都很明顯。戴安娜接受洗禮的教堂是桑德林漢姆教堂，教母也只是普通的富戶人家。
按照心理學家弗洛伊德的學說，特別是童年的記憶，將決定並持續影響人的一生。縱然一些人可以通過經歷努力擺脫心理困擾，但心理陰影不過成為了沉睡的岩石下的熔岩罷了。戴安娜雖然年幼，但她孩子的幼小心靈仍可明顯地感受到家人對自己的冷落和對弟弟的尊寵。她的心裡，開始告訴自己自己是個“令人失望的孩子”，有了自卑感和無足重輕感。這種自卑感持續了她整個少女時代及進入皇室的早期，直到她投身公益活動，受到熱烈愛戴時才找到了一種被認同、一種“to be”(存在)的價值感。